Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失呼吸道自身抗原到消失1型号肾病临床症状的方面领军在成年人时期就有较好的描绘，多个呼吸道自身抗原中性的成年人中所有70%在血清转化后10年内患上肾病，而随访15年的成年人这一比领军上升到84%。相相比较之下，占临床1型号肾病一半以上的型号1型号肾病的复发机制还没有受益充分的分析方法。

越来越多的人开始常用有管理系统管理系统来定义1型号肾病的方面：形态在消失多种呼吸道自身抗原时进到第1在此之后，消失血糖异常时进到第2在此之后，消失症状时进到第3在此之后。一些多发呼吸道自身抗原中性的形态，在1期和2期，方面较快，并工业发展为复发的1型号肾病。我们在此之后描绘了一小组在首次侦测到多种呼吸道自身抗原试样后至少10年无肾病的极慢方面者，这小组症状人数少，但特征非常明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白特异性CD8+T巨噬细胞反应在方面平稳的症状中所大体上不假定，但在现在此之后复发和密切相关的肾病症状中所很容易侦测到。这可能表明，与方面症状相相比较，这些症状自身免疫的缓冲进一步提高。

一时期分析方法表明，尽管缓冲性T巨噬细胞(Treg)需求量正常，但肾病症状假定一些动态毛病，其中所包括对IL-2的反应能力降低。此外，肾病症状中所的畸变CD4+T巨噬细胞可能对缓冲更具抵抗性，展示出为畸变T巨噬细胞的可抑制逼近，自然消除的Treg和体外消除的诱导Treg，以及蛋白经历的CD4+T巨噬细胞中所IL-2反应逼近。本分析方法的目的是描绘了CD4+缓冲性T巨噬细胞(Treg)在一小群极平稳方面者中所的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析方法是一项以人群为基础的纵向分析方法，在21岁一般而言确诊的症状亲属中所侦测1型号肾病的危险因素所。我们在此之后描绘了仍然平稳方面者的特征，他们保持多重呼吸道自身抗原中性大约10年，但没有消失肾病的临床症状，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保持无肾病并愿意提供大量体内试样的平稳方面者纳入T和B巨噬细胞动态分析方法。在在此在此之后的分析方法中所，8名慢方面者(SP小组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身抗原中性。所有的大多数人都西北面1型号肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗原对某些蛋白的中性反应，然而，一名症状已经西北面2期至少6年，但没有消失临床症状，一名症状被诊断为肾病，该受试者72岁，在挖掘实验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在建模中所对该NADPH完成了除此以外检查和。分离外周血单个核子巨噬细胞(PBMCs)，引入多数值流式巨噬细胞精和T巨噬细胞可抑制试验检查和NADPH中所Treg的振幅、性状和动态。常用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和回归)完成无督导聚类分析方法，检查和Treg性状。

结果：与保健NADPH相相比较，来自慢方面体的梦境CD4+T巨噬细胞的督导聚类辨识，触发的梦境CD4+ Treg振幅上升，与持续性诱导的TNFR关的蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升高的症状与方面平稳者和冗余的对照小组相相比较，Treg谱有所相异。动态分析方法表明，与保健NADPH相相比较，来自平稳方面体的Treg介导的CD4+畸变T巨噬细胞可抑制明显受损。展示出为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的可抑制上升。

上图1 深入的性状分析方法辨识，CD4+Treg亚型号在慢方面链表中所上升。由FlowSOM聚合的Treg房，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物表述核对出新10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)常用9个相异Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个端口推选一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在端口小组周围上色。每个端口中所的饼上图表示单个上面的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以辨识整体上面表述。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)聚合上图，以及FlowSOM识别管理系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起丰度为每个metacluster木箱线上图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。橙色红色推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检查和。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 常用CITRUS的预测模型号表明，Treg振幅的上升是方面平稳的标志。PG介导(a - f)和果树分析方法(g-k)相比较SP大多数人和冗余的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的指标性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述完成分离，各种类型FlowSOM人群。(b) HD(白斑)和SP(白点)小组以及NADPHSP 606(橙色)中所CD25+ cd127的振幅综合上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导空集的木箱线上图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述低压后处理，箭头突出新的簇被识别管理系统为SP和HD链表错综复杂的相异。(j)木箱线上图辨识了在SP(白点)和HD(灰点)小组中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起丰度(比领军)。(k)直方上图辨识每个簇的性状(粉红色)和Treg上面比起表述与背景表述(红色);上列，缓存Treg_3;下面四人，缓存Treg_4。背景与所有其他簇中所上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检查和

上图3 与保健献血者相相比较，方面平稳者梦境treg的GITR上升。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表述上面的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表述热上图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表述串联，辨识直方上图(c)和综合上图(d)。Wilcoxon配对小写秩和检查和，p< 0.07(橙色)所有NADPH包括，p< 0.05(红色)NADPHSP 606和冗余的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表述，从PG介导，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(橙色)串联，辨识直方上图(e)和综合上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检查和

上图4 来自平稳方面的CD4+ treg巨噬细胞压制畸变CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP小组用红色的线和红色表示，HD小组用白色的线和红色表示，橙色的线/红色表示NADPHsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按观察的比领军滴定。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培植3几天后完成流式巨噬细胞精侦测。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg培植(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制一般而言。常用中性对照(触发的积极响应巨噬细胞不含treg)计算可抑制一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

上图5 畸变CD4+T巨噬细胞对平稳方面的T巨噬细胞重置的可抑制更适合于。SP小组用红色的线和红色表示，HD小组用白色的线和红色表示，橙色的线/红色表示NADPHsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按观察的比领军滴定。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培植3几天后完成流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬细胞因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制百分领军(b)。(c,d) CD25可抑制百分领军(c)和CD134可抑制百分领军(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

论据：我们得出新的论据是，来自平稳方面子的重置梦境CD4+Treg在GITR表述中所受益了扩展和丰富，突显了进一步分析方法Treg在1型号肾病风险形态中所的异质性的必要性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28