Diabetologia：激活但系统受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到呼吸道自身病原体到用到1HG心血管疾病诊疗症状的成果赴援在孩童以前就有很好的揭示，多个呼吸道自身病原体感染性的孩童里曾70%在人体内转换后10年内中风心血管疾病，而随访15年的孩童这一%-提高到84%。比起之下，占多数诊疗1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的发作机制还不能给与前提的深入研究。

越来越多的人开始应用于分期系统来定义1HG心血管疾病的成果：个体在用到多种呼吸道自身病原体时转到第1阶段性，用到血糖持续性时转到第2阶段性，用到症状时转到第3阶段性。一些多发呼吸道自身病原体感染性的个体，在1期和2期，成果较快，并发展为发作的1HG心血管疾病。我们以前揭示了一两组在首次监测到多种呼吸道自身病原体样品后数10年无心血管疾病的极慢成果者，这两组高血压人数少，但相似性极其一致。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T细胞内反应会在成果较快的高血压里基本不存在，但在近期发作和长年存在的心血管疾病高血压里很容易监测到。这似乎说明，与成果高血压比起，这些高血压自身免疫反应会的适度提高。

后期深入研究说明，尽管适度性T细胞内(Treg)数量正常，但心血管疾病高血压存在一些功能缺陷，其里包括对IL-2的反应会控制能力降低。此外，心血管疾病高血压里的现象CD4+T细胞内似乎对适度极其具抵抗性，显出为现象T细胞内的减缓减弱，自然产生的Treg和排泄产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内里IL-2反应会减弱。本深入研究的目的是揭示了CD4+适度性T细胞内(Treg)在大群极较快成果者里的相似性，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群相结合的纵向深入研究，在21岁以下胃癌的高血压亲属里反应器对1HG心血管疾病的危险因素。我们以前揭示了长年较快成果者的相似性，他们保持稳定多重呼吸道自身病原体感染性超过10年，但不能用到心血管疾病的诊疗症状，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无心血管疾病并愿意提供大量血液样品的较快成果者纳入T和B细胞内功能深入研究。在目前的深入研究里，8名慢成果者(SP两组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的呼吸道自身病原体感染性。所有的旁观者都处于1HG心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身病原体对某些抗原的感染性反应会，然而，一名高血压已经处于2期数6年，但不能用到诊疗症状，一名高血压被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究里对该NADPH透过了另行分析。剥离外周血单个反应器细胞内(PBMCs)，采行多参数流式细胞内拳法和T细胞内减缓试验性分析NADPH里Treg的频赴援、表HG和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、并不一定和回归)透过无都由聚类深入研究，分析Treg表HG。

结果：与健康NADPH比起，来自慢成果体的无意识CD4+T细胞内的都由聚类看出，抑制的无意识CD4+ Treg频赴援提高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读提高有关。一名HbA1c升高的高血压与成果较快者和匹配的对照两组比起，Treg谱有所不同。功能推断，与健康NADPH比起，来自较快成果体的Treg介导的CD4+现象T细胞内减缓明显受损。显出为对现象CD4+T细胞内CD25和CD134解读的减缓提高。

图1 有系统的表HG深入研究看出，CD4+Treg亚HG在慢成果表头里提高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物解读检验出10个元簇:无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，极其大的元集群(10个元集群)在节点两组远处上色。每个节点里的饼图暗示单个标识的解读级别。(b)每个元聚类的热图，以看出整体标识解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比丰度为每个metacluster装有终点站图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞内(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞内(l)。橘色圆圈代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验。此键适用于图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

图2 应用于CITRUS的预测模HG证实，Treg频赴援的提高是成果较快的标志。分级离子通道(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR解读透过剥离，实时FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及NADPHSP 606(橘色)里CD25+ cd127的频赴援综合图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的装有终点站图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头突出的簇被识别系统为SP和HD表头错综复杂的不同。(j)装有终点站图看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比丰度(%-)。(k)直方图看出每个簇的表HG(蓝色)和Treg标识相比解读与故事情节解读(深蓝色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇里标识的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验

图3 与健康献血者比起，成果较快者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T细胞内元簇(无意识T细胞内_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞内;HLA-DR + GITR +无意识T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个解读标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的解读热图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读串联，看出直方图(c)和综合图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NADPH包括，p< 0.05(深蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)串联，看出直方图(e)和综合图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩检验

图4 来自较快成果的CD4+ treg细胞内遏制现象CD4+T细胞内的控制能力降低。SP两组用深蓝色的终点站和圆圈暗示，HD两组用黑色的终点站和圆圈暗示，橘色的终点站/圆圈暗示NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(；也者)被标识为CFSE, Treg按判读的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培训3当晚透过流式细胞内拳法监测。(a-d)与CD4+；也者相比应的treg培训(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百份。应用于感染性对照(抑制的拥护细胞内不含treg)计算减缓百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

图5 现象CD4+T细胞内对较快成果的T细胞内活化的减缓极其脆弱。SP两组用深蓝色的终点站和圆圈暗示，HD两组用黑色的终点站和圆圈暗示，橘色的终点站/圆圈暗示NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标识，treg按判读的%-指示剂。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培训3当晚透过流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者联合培训。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓百分赴援(b)。(c,d) CD25减缓百分赴援(c)和CD134减缓百分赴援(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出的结论是，来自较快成果子的活化无意识CD4+Treg在GITR解读里给与了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1HG心血管疾病风险个体里的互补的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28